《C-端设计定点突变提高StreptomycesAvermitilis壳聚糖酶稳定性及催化活性》

技术简介：

为提高阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)SaCsn46A壳聚糖酶的温度稳定性，利用SWISS-MODEL在线服务器，以链霉菌SirexAA-E壳聚糖酶(PDB登录号：4ily.1A)为模板对SaCsn46A的蛋白结构进行同源模拟，将预测获得的SaCsn46A蛋白结构提交至在线预测软件PoPMuSiC-2.1,寻找对SaCsn46A稳定性有显著影响的氨基酸残基，通过定点突变构建突变体，在大肠杆菌(Escherichiacoli)Rosetta中异源表达野生型壳聚糖酶及突变体。经Ni-NTA亲和层析获得电泳纯重组酶蛋白，测定野生型壳聚糖酶及突变体G237A的酶学性质，发现突变体最适温度提高5℃,并且温度稳定性及pH稳定性显著提升。为进一步提高突变体的表达效率，对突变体表达菌株进行诱导条件优化，确定最优条件为IPTG浓度0.7mmol/L,诱导温度20℃,诱导时间8h。

研发人员：郭静;高文君;朱小梅;赵晗;张欣;王怡;王芯楺;赵希岳;蔡志强;